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ELISA實(shí)驗加樣時產(chǎn)生氣泡的原因及注意的細(xì)節(jié)

更新時間:2023-12-11      瀏覽次數(shù):784

ELISA實(shí)驗加樣時通常氣泡都是聚集在酶標(biāo)板的孔周圍,導(dǎo)致孔中液體不能與孔壁有效接觸,使孔內(nèi)反應(yīng)不均一。很多說明書、教科書上也都提到,加樣時要避免出現(xiàn)氣泡,這到底是什么原因呢?因為在做實(shí)驗的過程中,有時為了打干凈槍頭里面的液體,很容易產(chǎn)生氣泡,是不是這樣對實(shí)驗結(jié)果會后什么影響?

原因:

1.通常氣泡都是聚集在酶標(biāo)板的孔周圍,導(dǎo)致孔中液體不能與孔壁有效接觸,使孔內(nèi)反應(yīng)不均一。

2.包被時有氣泡的話,將導(dǎo)致包被不完-全實(shí)際包被里下降―–弱陽性甚至假陰性。

3.封閉時有氣泡的話,將導(dǎo)致大里未結(jié)合位點(diǎn)的存在,引起非特異性結(jié)合-–本底增高,假陽性。

4.加樣時有氣泡的話,抗原抗體不能有效的結(jié)合––弱陽性甚至假陰性。

5.加二抗時有氣泡的話,抗原抗體不能有效的結(jié)合––弱陽性甚至假陰性(競爭法相反-—–一假陽性>。

6.加顯色液時有氣泡的話-—–顯色不完-全。

7.加終止液時有氣泡的話(1、不能完-全終止反應(yīng)2、影響酶標(biāo)儀比色,OD值增高)

8.洗滌時有氣泡的話,非特異性結(jié)合物不能完-全洗去,做無用功。

注意事項:

精準(zhǔn)的儀器和準(zhǔn)確的操作是保證ELISA結(jié)果準(zhǔn)確關(guān)鍵,怎樣的加樣方式才是正確呢?ELISA實(shí)驗中一般有5次加樣,即加標(biāo)本、加檢測抗體、加酶結(jié)合物和加顯色底物及終止液。

1.實(shí)驗室使用的微量加樣器應(yīng)注意保養(yǎng)并定期校正。ELISA比較敏感,每孔加入液體量誤差會導(dǎo)致結(jié)果讀數(shù)差別,因此避免儀器帶來誤差。

2.加樣前,溶液充分混勻,垂直懸空加入液體,避免加在孔壁上,不可產(chǎn)生氣泡。

3.加樣時避免液體濺出,如有樣本濺出,應(yīng)用吸水紙輕輕拭干,并做相應(yīng)記錄。

4.如果加樣槍漏氣以至于加樣的量不夠,不能用槍吸出再加,做相應(yīng)記錄實(shí)驗。

5.每次加樣順序一致,尤其底物、終止液順序一致,保證每個孔顯色時間相同。



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