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PCR反應(yīng)詳細(xì)基本步驟

更新時間:2024-06-20      瀏覽次數(shù):406

聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(Polymerase chain raction ,PCR)是一種在體外擴增特定DNA片段的方法,具有特異、敏感、產(chǎn)率高、快速、簡便、重復(fù)性好、易自動化等突出優(yōu)點,可用很短時間使目的基因或某一片段擴增十萬乃至幾百萬倍。PCR反應(yīng)基本步驟:


1、變性:根據(jù)DNA高溫變性的原理,將反應(yīng)體系溫度升至變性溫度(高于模板熔點,約95℃),使目的DNA雙鏈裂解成PCR模板(單鏈)。[95℃,30s]


2、退火:將反應(yīng)體系溫度驟降至退火溫度(低于引物熔點約55℃),是PCR引物與PCR模板3’端雜交,稱為退火。[55~65℃,30s]


3、延伸:將反應(yīng)體系溫度升至延伸溫度(約72℃),DNA聚合酶按照堿基配對原則在引物3’端以5’→3’方向催化合成PCR模板新的互補鏈,使目的DNA拷貝數(shù)增加1倍。[72℃,30~60s]


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