Cassification
技術(shù)文章/ Technical Articles
在培養(yǎng)細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)中,難免培養(yǎng)的細(xì)胞被污染了,得不到想要的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,那么你知道細(xì)胞培養(yǎng)的污染來源有哪些嗎?細(xì)胞培養(yǎng)過程中污染的來源主要有以下幾條途徑:一、不潔的動物組織標(biāo)本很多動物組織本該是無菌的(直接與外界相通的呼吸道和消化道、泌尿系統(tǒng)除外),但由于取材時(shí)不小心也會有污染的機(jī)會。組織本身含有細(xì)菌,如取材時(shí)不用濃的抗生素洗液洗滌浸泡,也會帶菌,造成細(xì)胞污染。二、空氣空氣中含有大量的微生物,如果操作室與外界隔離不嚴(yán)或消毒不充分下,很容易造成污染。另外,凈化工作臺使用過久,濾板未定...
抗體保存溫度和條件抗體的保存方法一般會直接影響抗體的活性和使用效果。在保存得當(dāng)?shù)那闆r下,大部分抗體可以存放數(shù)月甚至數(shù)年,一般情況需嚴(yán)格按照抗體說明書來進(jìn)行保存??贵w保存溫度和條件:1、抗體收到后,需在12000rpm離心1~5分鐘,再打開管蓋進(jìn)行分裝和保存,如果抗體體積不足50ul,可延長離心時(shí)間至5分鐘,從而確保抗體全部離心下來。2、對于多數(shù)抗體而言,分裝成小等份并凍存于-20℃或-80℃是zuijia選擇。腹水形式的產(chǎn)品收到后需立即凍存,因?yàn)樵擃惍a(chǎn)品含有大量的蛋白酶,長期...
ELISA酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)程序,通常是把蛋白、抗體、或激素等(即抗原)直接或是以捕捉抗體(captureAb)固定在固相載體上,再加入一級檢測抗體(primarydetectionAb),形成一個(gè)抗原抗體的復(fù)合物。如果該抗體已經(jīng)用酶(enzyme)標(biāo)記了,即可用來直接測定抗原的量,若無,則可利用另一個(gè)酶標(biāo)記的二級抗體來測定抗原的量。測定抗原量的方法是加入該酶的底質(zhì)(substrate),作用后產(chǎn)生出現(xiàn)的顏色深淺和樣本中的抗原量呈正比的關(guān)系,依此原理計(jì)算出樣本中的抗原總量...
佰利萊生物為您講解PCR反應(yīng)效率低值解析反應(yīng)效率視為實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析設(shè)計(jì)和優(yōu)化的關(guān)鍵因素。利用標(biāo)準(zhǔn)曲線(通過對目標(biāo)模板進(jìn)行連續(xù)梯度稀釋獲得)獲取效率值。該效率值可作為總反應(yīng)的“健康”標(biāo)志。低效率與高效率所造成的影響有所不同。改善上述兩種情形的步驟則相差甚遠(yuǎn)。理想的反應(yīng)效率為100%,但反應(yīng)效率在90–110%范圍內(nèi)都是可以接受的。確定某個(gè)特定的分析效率是否低下的方法是稀釋模板生成標(biāo)準(zhǔn)曲線(模板稀釋的范圍應(yīng)涵蓋所有未知樣本),然后查看該范圍內(nèi)的效率。它應(yīng)盡可能接近100%...
ELISA檢測試劑盒試驗(yàn)溫育解讀在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應(yīng),即加酶結(jié)合物和顯色劑后。抗原抗體反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時(shí)間,這一保溫過程稱為溫育(incubation),有人稱之為孵育。溫育的時(shí)間選擇:溫育這一步是ELISA測定中最容易出現(xiàn)問題的步驟。目前國內(nèi)ELISA試劑盒的反應(yīng)溫育時(shí)間為37℃30分鐘-1小時(shí),進(jìn)口ELISA試劑盒則通常為37℃1-2小時(shí)才能有較wan全的結(jié)合,低于1小時(shí),可能會影響測定下限。ELISA屬固相免疫測定,抗原、抗體的結(jié)合只在固相表...
ELISA試劑盒結(jié)果判定:1、結(jié)果的判定嚴(yán)格依據(jù)試劑盒提供的陽性判定值(CO)進(jìn)行結(jié)果判定。廠商提供試劑的同時(shí),說明書上列出的CO值是建立在一系列科學(xué)試驗(yàn)及統(tǒng)計(jì)研究的基礎(chǔ)上,不應(yīng)隨意更改。定量測定需要制備標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算結(jié)果。2、灰區(qū)的設(shè)置通常情況下ELISA結(jié)果報(bào)告方式為“陰性"或“陽性",在二者之間有一條明確的分界線,也就是所謂的陽性判定值即CO值,對于樣本的吸光度值(A)高于CO值就判斷為陽性,相反則判斷為陰性,然而在實(shí)際工作中經(jīng)常會出現(xiàn)樣本A值位于CO值附近...
細(xì)胞是生命的基本單位。(除了病毒外。)細(xì)胞由細(xì)胞核組成和細(xì)胞膜還有線粒體等組成。(除個(gè)別生物)小到細(xì)菌大至鯨魚。都由細(xì)胞組成。細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)用技巧總括:1.買細(xì)胞要去正規(guī)的地方購買,一般產(chǎn)品資料上面會有針對細(xì)胞的詳細(xì)介紹,這樣在培養(yǎng)之前可以了解細(xì)胞正常生長的狀態(tài)圖、傳代、培養(yǎng)基的類型等。2.不管是買的細(xì)胞,還是他人惠贈的細(xì)胞,剛拿到手需要趕緊做的兩件事:一檢測是否有支原體污染;二迅速擴(kuò)增凍存,凍存細(xì)胞復(fù)蘇后第二天更換一次培養(yǎng)基。3.發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有污染迅速處理掉,特別是當(dāng)養(yǎng)了很多種細(xì)胞...
化學(xué)滅菌法系指利用化學(xué)藥品的氣體或產(chǎn)生的蒸汽進(jìn)行殺滅微生物的方法。同一種化學(xué)藥品的低濃度時(shí)呈現(xiàn)抑菌作用,而在高濃度時(shí)則能起殺菌作用。其殺菌機(jī)理可能是:能使微生物蛋白質(zhì)變性死亡,或與酶系統(tǒng)結(jié)合影響代謝,或改變膜壁通透性使微生物死亡等?;瘜W(xué)氣體滅菌法可分為三種:臭氧消毒法、甲醛等蒸汽熏蒸法、環(huán)氧乙烷滅菌法。下面詳解三種化學(xué)氣體滅菌法:1.臭氧消毒法臭氧(O3)的消毒原理是:臭氧在常溫、常壓下分子結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定,很快自行分解成氧(O2)和單個(gè)氧原子(O),后者具有很強(qiáng)的活性,對細(xì)菌有強(qiáng)...
抗體是什么:抗體是哺乳動物適應(yīng)性免疫系統(tǒng)對抗病原體的核心,它是在病原體刺激下由漿細(xì)胞(效應(yīng)B細(xì)胞)所分泌的一種免疫球蛋白,能夠識別并結(jié)合特異的病原體抗原,隨后通過介導(dǎo)中和作用、調(diào)理作用、效應(yīng)T細(xì)胞殺傷等來清除病原體。隨著抗體制備與改造技術(shù)的飛速發(fā)展,抗體已經(jīng)廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)各個(gè)領(lǐng)域,包括科學(xué)研究、診斷、治療等。抗體的制備歷史和工藝決定了抗體的質(zhì)量和類型??贵w制備工藝可分為三個(gè)階段:傳統(tǒng)方法免疫動物獲得抗體、應(yīng)用雜交瘤技術(shù)制備抗體和基因工程技術(shù)制備抗體。具體如下:1、傳統(tǒng)方法...
細(xì)胞凋亡(apoptosis)指為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定,由基因控制的細(xì)胞自主的有序的死亡。細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死不同,細(xì)胞凋亡不是一件被動的過程,而是主動過程,它涉及一系列基因的激活、表達(dá)以及調(diào)控等的作用,它并不是病理?xiàng)l件下,自體損傷的一種現(xiàn)象,而是為更好地適應(yīng)生存環(huán)境而主動爭取的一種死亡過程。壞死(necrosis):壞死是細(xì)胞受到強(qiáng)烈理化或生物因素作用引起細(xì)胞無序變化的死亡過程。表現(xiàn)為細(xì)胞脹大,胞膜破裂,細(xì)胞內(nèi)容物外溢,核變化較慢,DNA降解不充分,引起局部嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)。細(xì)胞凋亡...
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